細胞の継代とは、細胞を細かく分割し、別の培養容器に播種し、再度培養することを指します。 細胞培養フラスコは、継代中に一般的に使用される消耗品です。 それでは、細胞継代の具体的な手順は何でしょうか?
1.細胞培養フラスコをインキュベーターから取り出し、アルコールスプレーフラスコで75％アルコールをフラスコ表面にスプレーし、ウルトラクリーンベンチに移します。
2. 細胞培養フラスコの蓋を開け、古い培地を静かに吸引し、適量の PBS 緩衝液をパスツールピペットで加え、1-2 回洗浄し、PBS 緩衝液を捨てます。
3. ピペットを使用して細胞培養フラスコに 1-2 ml のトリプシンを追加し、「クロス」を振ってトリプシンと細胞を完全に接触させます。
4. トリプシンの入った細胞培養フラスコを倒立顕微鏡ステージに移し、顕微鏡下で細胞の消化を観察し、細胞が丸くなり、多数の細胞が剥がれ落ちたら、消化を終了する準備をします。 フラスコの表面に 75 パーセントのアルコールをスプレーし、ウルトラ クリーン ベンチに移します。
5. 細胞培養フラスコに等量の血清含有培地を補充し、消化を終了します。 ピペットを十分に吹き込んで叩き、細胞を完全に落とします。
6. 細胞培養フラスコ内の混合液を遠沈管に移し、平衡を保った後、約5分間遠心分離します。
7. 細胞培養フラスコを遠心分離した後、遠沈管表面にアルコールスプレーフラスコを吹き付け、ウルトラクリーンベンチに移し、蓋を開け、上清を廃液シリンダーに注ぎます。
8. 細胞培養フラスコに血清を含む培地を適量加え、ピペットまたはパスツールピペットで軽く叩き、細胞懸濁液を調製します。
9. 細胞懸濁液を 2 つ (またはそれ以上) の滅菌済みの清潔な細胞培養フラスコに分け、適量の培地を加え、蓋を閉めます。
10. 分割した細胞培養フラスコを倒立顕微鏡ステージ上に置き、細胞の状況を観察します。 セル数は保証されている必要があります。 細胞が少なすぎると、その成長に影響します。
11. 細胞培養フラスコのフラスコに、通過時間、細胞の種類、操作者、およびその他の情報を示すラベルを作成します。 インキュベーターに入れる前にフラスコ表面にアルコールをスプレーし、手術台を整理し、ウルトラクリーンベンチを75％アルコールで拭き、廃液やゴミを清掃します。
以上が細胞培養フラスコを用いた細胞継代の具体的なプロセスです。 操作時は、滅菌服、滅菌手袋、マスクの着用に注意し、細胞の汚染を避けるために操作全体を無菌的に行う必要があります。
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